Particules Lentivirales d'Activation (h) ETAR: sc-401000-LAC

EDNRA code le récepteur de l’endothéline de type A (ETAR), un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à l’endothéline‑1 pour réguler la contraction du muscle lisse vasculaire et, plus largement, l’homéostasie cardiovasculaire. Après liaison du ligand, ETAR signale principalement via Gαq/11 pour activer la phospholipase C, augmenter le Ca2+ intracellulaire et stimuler la PKC, avec en complément un couplage aux voies MAPK/ERK et RhoA/ROCK qui influencent la prolifération, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire. La signalisation pilotée par EDNRA s’articule également avec des programmes inflammatoires et associés à l’hypoxie qui modulent la communication endothélium–muscle lisse. Une activité d’ETAR dérégulée et un déséquilibre de l’axe endothéline sont impliqués dans des contextes de dysfonction vasculaire et de remodelage, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’exploration des voies de signalisation dans des modèles cellulaires appropriés.

Les particules d'activation lentivirales ETAR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EDNRA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ETAR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EDNRA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ETAR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EDNRA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.