Plasmide Double Nickase (h) ERK 5: sc-400891-NIC

MAPK7 code pour ERK5, une protéine kinase atypique activée par les mitogènes (MAPK), activée en aval de MEK5 en réponse aux facteurs de croissance et au stress cellulaire. ERK5 intègre les signaux de la cascade MAPK afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la survie, la différenciation et la dynamique du cytosquelette, avec des rôles marqués dans la fonction endothéliale et la signalisation induite par les forces de cisaillement. Par la phosphorylation de substrats et la régulation de facteurs de transcription tels que les membres de la famille MEF2, ERK5 influence la signalisation inflammatoire et l’adaptation cellulaire aux signaux du microenvironnement. Une activité dérégulée de MAPK7/ERK5 a été associée à une altération des réseaux de signalisation oncogéniques ainsi qu’à des phénotypes vasculaires et inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour les études de voies et de mécanismes dans les cellules humaines.

ERK 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAPK7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAPK7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAPK7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAPK7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.