Plasmide CRISPR d'Activation (h) ERBIN: sc-402637-ACT

ERBIN (protéine interagissant avec ERBB2) est une protéine d’échafaudage contenant un domaine PDZ, localisée aux membranes basolatérales, où elle coordonne l’assemblage des complexes de récepteurs, leur trafic et l’orientation des signaux. Elle module l’activité de la voie ERBB2/EGFR et s’articule avec les voies MAPK et PI3K en organisant des nœuds de signalisation proches de la membrane et en couplant les récepteurs à des effecteurs en aval. ERBIN influence également la polarité épithéliale et l’organisation des jonctions via des interactions avec des régulateurs de la polarité et de l’adhérence, façonnant ainsi l’architecture cellulaire et la fidélité de la signalisation. Une expression dérégulée d’ERBIN ou une fonction d’échafaudage altérée a été associée à une signalisation aberrante des facteurs de croissance et à des défauts de polarité, pertinents pour des études mécanistiques en oncologie et dans d’autres pathologies épithéliales.

ERBIN Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERBIN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ERBIN Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERBIN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERBIN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ERBIN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERBIN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ERBIN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ERBIN dans les cellules tumorales présentant une expression de ERBIN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.