ErbB2/HER2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400138-NIC

ERBB2は受容体型チロシンキナーゼであるErbB2/HER2をコードしており、EGFR/ErbBファミリーの一員で、成長因子シグナル伝達を増幅するうえで好ましいヘテロ二量体形成パートナーとして機能する。活性化されると、HER2は下流のMAPK/ERK経路およびPI3K–AKT–mTOR経路を刺激し、増殖、生存、代謝、細胞周期の進行を制御する。ERBB2の機能異常（ディスレギュレーション）は、受容体トラフィッキングの変化、持続的なマイトジェンシグナル、ならびに上皮分化プログラムの変容と強く関連している。その結果、ERBB2はヒト細胞モデルにおける腫瘍性シグナル伝達ネットワーク、受容体間クロストーク、経路の再配線（リワイヤリング）を研究するために広く用いられる分子ハブとなっている。

ErbB2/HER2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ERBB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ERBB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ERBB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ERBB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。