EPI64 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407095

Übersicht

TBC1D10A kodiert EPI64, ein Rab-GTPase-aktivierendes Protein, das den vesikulären Transport moduliert, indem es die GTP-Hydrolyse bei ausgewählten Mitgliedern der Rab-Familie beschleunigt. Durch die Regulation des endozytischen Recyclings und des Membrantransports beeinflusst EPI64 den Rezeptorumsatz, die Identität zellulärer Kompartimente und die Weiterleitung von Signalen von der Plasmamembran in endosomale Netzwerke. Diese Prozesse überschneiden sich mit der Organisation des Zytoskeletts und Programmen der Zellmigration, die in der Immun-Signalgebung und bei krebsassoziierten Phänotypen häufig umprogrammiert werden. Eine fehlregulierte Rab-vermittelte Transportdynamik wurde mit veränderter Proliferation, Invasion und entzündlichen Antworten in Verbindung gebracht, was TBC1D10A zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Membrandynamik in menschlichen Zellen macht.

Das EPI64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TBC1D10A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TBC1D10A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TBC1D10A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EPI64-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TBC1D10A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EPI64-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TBC1D10A-Exone abzielen, die für die EPI64-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TBC1D10A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EPI64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EPI64 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TBC1D10A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EPI64 HDR-Plasmid (h) und EPI64 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TBC1D10A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TBC1D10A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.