EphB6 Double Nickase Plasmid (h): sc-403979-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphB6 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphB6 Double-Nickase-Plasmid (h) und EphB6 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPHB6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EphB6: sc-398795
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphB6 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403979-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphB6 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403979-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHB6 kodiert EphB6, ein kinase-inaktives Mitglied der Eph-Rezeptor-Tyrosinkinasenfamilie, das die Zell-Zell-Kommunikation über Interaktionen mit Ephrin‑B-Liganden reguliert. EphB6 ist an kontaktabhängiger Signalübertragung beteiligt, die den Umbau des Zytoskeletts, Zelladhäsion und gerichtete Migration moduliert und damit Prozesse wie die Organisation von Epithelgewebe und das Verhalten von Immunzellen beeinflusst. Über Crosstalk mit Signalwegen, darunter Rho‑GTPase-Signalisierung sowie MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Netzwerke, kann EphB6 nachgeschaltete Transkriptionsprogramme und Zellschicksalsentscheidungen mitprägen. Eine veränderte EPHB6-Expression wurde in verschiedenen Tumorkontexten mit Tumorprogression und metastatischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Ziel für mechanistische Studien zu Invasion und Signalgebung im Mikromilieu unterstreicht.
EphB6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHB6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHB6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHB6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHB6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.