Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EP4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401146-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EP4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EP4 Double-Nickase-Plasmid (h) und EP4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTGER4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EP4: sc-55596
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EP4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401146-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EP4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401146-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTGER4 kodiert den humanen Prostaglandin‑E2‑Rezeptor EP4, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der überwiegend über Gs signalisiert, um cAMP zu erhöhen und PKA/CREB‑abhängige Transkriptionsprogramme zu aktivieren. EP4 vermittelt zudem β‑Arrestin‑ sowie PI3K/AKT‑ und ERK/MAPK‑gekoppelte Signalwege und koordiniert damit die Regulation von Entzündungsreaktionen, Gefäßtonus, epithelialer Barrierefunktion und Zellmigration. In Immun‑ und Stromakompartimenten moduliert EP4 nachgeschaltet zu COX‑abgeleitetem PGE2 die Zytokinproduktion und den Leukozytentransport und verknüpft so Prostanoid‑Signalgebung mit umfassenderen immunregulatorischen Netzwerken. Eine dysregulierte PTGER4/EP4‑Aktivität wurde mit chronisch‑entzündlichen Phänotypen und einer veränderten Gewebehomöostase in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Studien zur Biologie entzündungsassoziierter Erkrankungen stützt.
EP4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTGER4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTGER4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTGER4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTGER4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.