ENX-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403611-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ENX-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ENX-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ENX-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EZH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ENX-2: sc-515817
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ENX-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ENX-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EZH1 kodiert die Polycomb-Gruppen-Histonmethyltransferase ENX-2, eine katalytische Komponente des PRC2-Komplexes, die H3K27me3 ablagert, um Programme der Transkriptionsrepression zu etablieren und aufrechtzuerhalten. ENX-2 trägt zur Chromatinkondensation, zur Kontrolle der Zellidentität und zur Regulation entwicklungsrelevanter Gene bei und wirkt dabei zusammen mit den zentralen PRC2-Partnern, um linienspezifische Transkriptionsnetzwerke zu modulieren. In menschlichen Zellen ist die EZH1-Aktivität mit epigenetischer Reprogrammierung, Zellzykluskontrolle und Differenzierungswegen verknüpft und ergänzt EZH2 bei der Ausprägung repressiver Chromatinlandschaften. Eine fehlregulierte, PRC2/EZH1-vermittelte Stilllegung von Genen sowie veränderte H3K27-Methylierungszustände werden mit onkogenem transkriptionellem Rewiring und weiteren Erkrankungen in Verbindung gebracht, die auf eine aberrante epigenetische Regulation zurückgehen.
ENX-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EZH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EZH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EZH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EZH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.