Enamelin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420174

Übersicht

Enam kodiert Enamelin, ein sezerniertes Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das für die Bildung des Zahnschmelzes bei der Maus essenziell ist. Enamelin ist an der Biomineralisation des Schmelzes beteiligt, indem es die Nukleation und das Wachstum von Hydroxylapatitkristallen reguliert und in Zusammenarbeit mit anderen Amelogenese-Proteinen die Assemblierung und Prozessierung der Schmelzmatrix koordiniert. Seine Aktivität unterstützt ameloblastengesteuerte Matrixablagerung, proteolytisches Remodeling und Mineralreifungsprozesse, die Schmelzdicke und strukturelle Integrität bestimmen. Eine Störung der ENAM-Funktion ist mit Schmelzhypoplasie und amelogenesis-imperfecta-ähnlichen Phänotypen verknüpft und macht ENAM zu einem geeigneten Ziel für die Untersuchung der Entwicklung mineralisierter Gewebe und der Mechanismen von Zahnerkrankungen.

Das Enamelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Enam-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Enam-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Enam nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Enamelin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Enam-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Enamelin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Enam-Exone abzielen, die für die Enamelin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Enam-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Enamelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Enamelin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Enam-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Enamelin HDR-Plasmid (m) und Enamelin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Enam-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Enam-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.