ELOVL5 Plasmide Double Nickase (h): sc-417429-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ELOVL5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ELOVL5 Double Nickase Plasmid (h) e il ELOVL5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ELOVL5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ELOVL5 Antibody (B-3): sc-374138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ELOVL5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417429-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ELOVL5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417429-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELOVL5 codifica un’elongasi che catalizza l’allungamento degli acidi grassi polinsaturi a catena lunga in acidi grassi a catena molto lunga, sostenendo la sintesi dei lipidi di membrana e di mediatori di segnalazione derivati dai lipidi. Agisce nel metabolismo lipidico del reticolo endoplasmatico e si interseca con vie che regolano il rimodellamento dei fosfolipidi, la disponibilità dei precursori di eicosanoidi e docosanoidi e le risposte allo stress cellulare legate alla composizione di membrana. Un’alterata attività di ELOVL5 è stata associata a una disregolazione dell’omeostasi lipidica in contesti metabolici e infiammatori ed è stata implicata in fenotipi neurodegenerativi in cui la composizione degli acidi grassi influenza la funzione neuronale. Di conseguenza, ELOVL5 è ampiamente studiato nella biologia dei sistemi del metabolismo lipidico, nella dinamica delle membrane e nella ricerca sui meccanismi basata sulla lipidomica.
ELOVL5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ELOVL5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ELOVL5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ELOVL5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ELOVL5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.