Elongin B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402154-ACT

ELOB codifica a Elongina B humana, um componente central do complexo Elongin BC que estabiliza proteínas adaptadoras do tipo SOCS-box e semelhantes a VHL e favorece a montagem de ligases de ubiquitina E3 do tipo Cullin-RING. Por meio desses complexos, a Elongina B contribui para a proteostase dependente de ubiquitina e para a regulação de programas transcricionais ligados ao alongamento da RNA polimerase II e a vias de sensoriamento de oxigênio. As montagens de ligase associadas a ELOB influenciam a degradação de reguladores-chave de sinalização e do ciclo celular, conectando a função da Elongina B a respostas ao estresse celular, ao controle da proliferação e à integridade do genoma. A desregulação da ubiquitinação dependente de Elongin BC tem sido implicada em sinalização oncogênica e em respostas alteradas à hipóxia, tornando ELOB um ponto útil para estudos mecanísticos de redes de degradação proteica.

Elongin B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELOB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Elongin B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELOB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELOB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Elongin B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELOB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Elongin B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Elongin B em células tumorais com expressão de ELOB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.