Plásmido CRISPR de Activación (h) EF-1 α2: sc-401444-ACT

EEF1A2 codifica el factor de elongación de la traducción humano EF-1α2, una GTPasa que entrega los ARNt aminoacilados al sitio A del ribosoma y ayuda a mantener una síntesis proteica eficiente y de alta fidelidad. Más allá de su función central en la traducción, EF-1α2 se ha relacionado con la organización del citoesqueleto y con programas de crecimiento celular mediante el acoplamiento de la capacidad traduccional a redes de señalización que regulan la proliferación, la adaptación al estrés y la diferenciación. La expresión o actividad alteradas de EEF1A2 se han asociado con una proteostasis desregulada y con la remodelación del estado celular observadas en múltiples contextos patológicos, incluidos fenotipos del neurodesarrollo y la transformación oncogénica. En consecuencia, EEF1A2 es un nodo útil para estudiar el control traduccional, la homeostasis del proteoma y cómo los cambios en el equilibrio de los factores de elongación reconfiguran los fenotipos celulares.

EF-1 α2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EEF1A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EF-1 α2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EEF1A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EEF1A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EF-1 α2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EEF1A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EF-1 α2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EF-1 α2 en células tumorales con expresión de EEF1A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.