Plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-2 (m): sc-420644

Présentation

Lpar1 code pour EDG-2, un récepteur couplé aux protéines G de l’acide lysophosphatidique (LPA) qui convertit des signaux lipidiques extracellulaires en programmes intracellulaires contrôlant la migration, la prolifération et la survie cellulaires, ainsi que le remodelage du cytosquelette. EDG-2 mobilise principalement les voies Gαi/o, Gαq/11 et Gα12/13 pour activer PI3K–AKT, la signalisation PLC–Ca2+ et la dynamique de l’actine médiée par RhoA/ROCK, influençant l’adhérence et la contractilité. Dans les tissus murins, la signalisation de Lpar1 contribue à des processus du neurodéveloppement, aux réponses vasculaires et fibroblastiques, ainsi qu’au trafic des cellules immunitaires via la régulation de la chimiotaxie et de la fonction de barrière. Une activité LPA–EDG-2 dérégulée a été impliquée dans le remodelage inflammatoire et fibrotique et dans des mécanismes pertinents pour la motilité des cellules tumorales et les interactions avec le microenvironnement, ce qui étaye son utilité dans des modèles de maladies centrés sur des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EDG-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lpar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lpar1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lpar1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EDG-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lpar1 pour l'étude de la signalisation de EDG-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lpar1 essentiels à la fonction de EDG-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lpar1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EDG-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EDG-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lpar1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EDG-2 plasmide HDR (m) et le EDG-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lpar1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lpar1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.