EBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402177

概要

PA2G4はEBP1をコードしており、EBP1はRNAおよびタンパク質に結合する因子で、細胞質と核の両方に局在し、転写および翻訳レベルでの遺伝子発現の協調に関与します。EBP1は、受容体型チロシンキナーゼの下流シグナル伝達や、mRNA安定性、リボソーム関連プロセス、転写プログラムの調節を介した細胞周期の進行、増殖、分化の制御に関連づけられています。増殖制御経路やストレス応答性の遺伝子発現ネットワークに影響を与えることから、PA2G4は発がん性シグナル伝達や、増殖制御の破綻を特徴とするその他の疾患の文脈でしばしば研究されています。その多面的な役割により、ヒト細胞において増殖因子刺激がRNA代謝やクロマチン関連の制御とどのように統合されるかを解明するための有用な結節点（ノード）となります。

EBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPA2G4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PA2G4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PA2G4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EBP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EBP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PA2G4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EBP1の機能に不可欠なPA2G4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PA2G4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEBP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PA2G4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EBP1 HDRプラスミド（h）および EBP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPA2G4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPA2G4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。