Plásmido CRISPR de Activación (m) EAR2: sc-420216-ACT

El gen murino Nr2f6 codifica el receptor nuclear huérfano EAR2 (NR2F6), un factor de transcripción independiente de ligando que se une a elementos de respuesta hormonal para regular programas génicos que controlan la diferenciación, el metabolismo y la homeostasis inmunitaria. EAR2 se integra en redes de señalización de receptores nucleares y puede modular las salidas transcripcionales aguas abajo de señales inflamatorias y vías del desarrollo, incluida la comunicación cruzada dependiente del contexto con circuitos de receptores de retinoides y esteroides. En células inmunitarias, la actividad de NR2F6 se ha asociado con el ajuste fino de la expresión de citocinas y de las funciones efectoras de las células T, lo que lo hace relevante para estudiar mecanismos de tolerancia inmunitaria e inflamación crónica. Se ha informado de una expresión desregulada de NR2F6/EAR2 en múltiples firmas transcripcionales asociadas a enfermedades, lo que respalda su uso en modelos de biología del cáncer, autoinmunidad y remodelación tisular.

EAR2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nr2f6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EAR2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nr2f6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nr2f6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EAR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nr2f6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EAR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EAR2 en células tumorales con expresión de Nr2f6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.