Dyrk1A Lentiviral Activation Particles (h): sc-401928-LAC

DYRK1A kodiert die dualspezifische, durch Tyrosinphosphorylierung regulierte Kinase 1A (Dyrk1A), eine Serin/Threonin-Kinase, die sich selbst an Tyrosin autophosphoryliert und die Phosphorylierung vielfältiger nukleärer und zytoplasmatischer Substrate moduliert. Dyrk1A trägt zur Kontrolle des Zellzyklus, zur neuronalen Differenzierung, zur synaptischen Funktion und zur Proteostase bei, indem es Transkriptionsfaktoren, Spleißkomponenten und Signalintermediate reguliert und dabei in Signalwege wie MAPK/ERK, NFAT-abhängige Transkription sowie die Ribosomen-/Translationskontrolle eingreift. Eine veränderte DYRK1A-Gendosis wird stark mit neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich solcher, die mit Trisomie 21 assoziiert sind; zudem sind Varianten mit intellektueller Beeinträchtigung und autismusspektrumbezogenen Merkmalen verknüpft. Eine fehlregulierte DYRK1A-Aktivität wurde außerdem im Kontext der Tumorbiologie und phosphorylierungsbasierter, für Neurodegeneration relevanter Netzwerke untersucht.

Dyrk1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DYRK1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Dyrk1A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DYRK1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Dyrk1A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DYRK1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.