DYNC2H1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406180

Descripción general

DYNC2H1 codifica la cadena pesada de dineína citoplásmica 2, el principal motor retrógrado de la maquinaria de transporte intraflagelar (IFT) que impulsa el tráfico desde la punta del cilio hasta la base. Al acoplar la motilidad impulsada por ATP a los complejos IFT-A y a los complejos adaptadores de carga, DYNC2H1 es esencial para el ensamblaje y el mantenimiento de los cilios primarios y para la transducción de señales dependiente de cilios, incluida la dinámica de la vía Hedgehog. La alteración de DYNC2H1 compromete la estructura ciliar y modifica las salidas de señalización del desarrollo, lo que vincula este gen con ciliopatías humanas caracterizadas por fenotipos esqueléticos y del desarrollo. Estas funciones convierten a DYNC2H1 en un nodo útil para estudiar la biología de los cilios, el transporte de orgánulos y los programas transcripcionales regulados por vías de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DYNC2H1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DYNC2H1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DYNC2H1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DYNC2H1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DYNC2H1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DYNC2H1 para la investigación de la señalización de DYNC2H1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DYNC2H1 críticos para la función de DYNC2H1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DYNC2H1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DYNC2H1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DYNC2H1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DYNC2H1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DYNC2H1 (h) y el plásmido HDR DYNC2H1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DYNC2H1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DYNC2H1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.