Plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP22 (m): sc-430587

Présentation

Dusp22 code la phosphatase à double spécificité 22 (DUSP22), une phosphatase atypique des MAPK qui module la signalisation dépendante de la phosphorylation en déphosphorylant des résidus sérine/thréonine et tyrosine sur certains substrats. Dans les cellules immunitaires et non immunitaires de souris, DUSP22 a été associée à la régulation de la dynamique des voies MAPK, notamment de nœuds de signalisation sensibles au stress et aux mitogènes qui façonnent des sorties transcriptionnelles telles que les programmes de cytokines, les seuils d’activation et l’apoptose. En agissant sur l’équilibre kinases–phosphatases, DUSP22 influence les décisions de prolifération et de différenciation cellulaires, fréquemment perturbées dans les affections inflammatoires et en cancérologie. Une signalisation DUSP22 altérée a été associée à une dérégulation immunitaire et à un remaniement de voies oncogéniques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de phénotypes dépendants de la signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DUSP22 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dusp22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dusp22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dusp22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DUSP22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dusp22 pour l'étude de la signalisation de DUSP22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dusp22 essentiels à la fonction de DUSP22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dusp22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DUSP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DUSP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dusp22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DUSP22 plasmide HDR (m) et le DUSP22 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dusp22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dusp22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.