DTYMK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423426

概要

Dtymkはデオキシチミジル酸キナーゼ（DTYMK）をコードしており、dTMPをdTDPへリン酸化してDNAの複製および修復に必要なdTTPプールを維持する、細胞質に存在する必須酵素です。DTYMKは、チミジル酸のde novo合成とヌクレオチドのサルベージ経路を結び付けることで、バランスの取れたdNTP恒常性を介してS期の進行、ゲノム安定性、ならびにミトコンドリアDNAおよび核DNAの維持を支えます。dTTPの利用可能性が乱れると、複製ストレスやDNA損傷シグナルが増大し得るため、DTYMKの機能は細胞周期チェックポイントや染色体の完全性を制御する経路とも関連します。DTYMKはモデル系において増殖および神経発生に関わる表現型との関連が示唆されており、臨床的な転帰を示唆することなく、ヌクレオチド代謝に関連する疾患機序を検討する上でDtymkは有用な研究対象となります。

DTYMK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDtymk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dtymk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dtymkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DTYMKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DTYMKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dtymk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DTYMKの機能に不可欠なDtymkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dtymkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DTYMK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDTYMK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dtymk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DTYMK HDRプラスミド（m）および DTYMK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDtymkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDtymk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。