Dpl Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403482

Descripción general

PRND codifica la proteína humana Doppel (Dpl), una glicoproteína de membrana anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) de la familia de las proteínas priónicas, que se localiza en la superficie celular y en compartimentos de la vía secretora. Dpl se ha relacionado con la biología neuronal y reproductiva, con funciones descritas en interacciones célula–célula, respuestas al estrés oxidativo y regulación de señales de supervivencia, en conexión con vías que influyen en la función mitocondrial y la homeostasis redox. Se ha observado una expresión aberrante de PRND/Dpl en varios tipos de cáncer y se ha explorado como marcador de diferenciación alterada e invasividad, lo que respalda la investigación de su contribución a los fenotipos de las células tumorales. En el contexto del sistema nervioso, las proteínas de la familia priónica son relevantes para el control de calidad proteica y procesos asociados a la neurodegeneración, lo que convierte a PRND en un nodo útil para estudios mecanísticos de señalización asociada a membrana y adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dpl (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRND en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRND junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRND tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dpl.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRND para la investigación de la señalización de Dpl, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRND críticos para la función de Dpl
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRND para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dpl CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dpl CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRND. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dpl (h) y el plásmido HDR Dpl (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRND para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRND definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.