Doublecortin/DCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400033

Visão geral

DCX codifica a doublecortina, uma proteína associada a microtúbulos que se liga a microtúbulos polimerizados e os estabiliza para coordenar a migração neuronal, o crescimento de neuritos e a formação das camadas corticais durante o neurodesenvolvimento. A doublecortina atua em programas de remodelação do citoesqueleto que integram a dinâmica dos microtúbulos com o posicionamento do centrossoma e a orientação do cone de crescimento, influenciando a polarização e a extensão do axónio em neurónios em desenvolvimento. Variantes patogénicas ou desregulação de DCX estão associadas a perturbações do neurodesenvolvimento caracterizadas por organização cortical alterada, incluindo a lisencefalia ligada ao X e a heterotopia em banda subcortical. Como marcador de biologia celular de neuroblastos migratórios e neurónios imaturos, o DCX é amplamente utilizado para estudar trajetórias de desenvolvimento e mecanismos que regulam o posicionamento neuronal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Doublecortin/DCX (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DCX em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DCX, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DCX na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Doublecortin/DCX.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DCX para a investigação da sinalização de Doublecortin/DCX, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DCX críticos para a função Doublecortin/DCX
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DCX para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Doublecortin/DCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Doublecortin/DCX Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DCX. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Doublecortin/DCX Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Doublecortin/DCX (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DCX para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DCX definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.