Plásmido Doble Nickase (h) DOCK 180: sc-401387-NIC

DOCK1 codifica DOCK180, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina atípico que activa las GTPasas de la familia Rac para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina. Mediante interacciones con proteínas adaptadoras como ELMO, DOCK180 regula la adhesión dependiente de integrinas, la formación de lamelipodios, la fagocitosis y la migración celular dirigida, integrando señales de receptores tirosina cinasa y de vías de quimiocinas. Este eje de señalización sustenta procesos como el tráfico de células inmunitarias y la dinámica epitelial, y la desregulación de la señalización de Rac dependiente de DOCK1 se ha vinculado a un comportamiento invasivo y a un potencial metastásico alterado en múltiples contextos de cáncer. La actividad de DOCK1 también se estudia en escenarios inflamatorios y del neurodesarrollo, donde el control del citoesqueleto y el movimiento celular son centrales para el fenotipo.

DOCK 180 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DOCK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DOCK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DOCK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DOCK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.