DnaJB3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420974

Descripción general

Dnajb3 codifica DnaJB3, un miembro de la familia de cocaperonas Hsp40/DnaJ que se asocia con Hsp70 para regular el plegamiento y replegamiento de proteínas, así como la selección y gestión de polipéptidos mal plegados. Mediante la estimulación de la actividad ATPasa de Hsp70 mediada por su dominio J, DnaJB3 contribuye a la proteostasis celular y respalda vías de respuesta al estrés vinculadas al control de calidad proteico. Estos procesos se interrelacionan con las respuestas al estrés del retículo endoplásmico y con mecanismos de eliminación proteolítica que influyen en la supervivencia celular bajo condiciones proteotóxicas. La alteración del funcionamiento de la red de chaperonas es ampliamente relevante en modelos de disfunción metabólica y neurodegeneración, donde la proteostasis deficiente y la señalización de estrés contribuyen a fenotipos asociados a la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DnaJB3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dnajb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dnajb3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dnajb3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DnaJB3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dnajb3 para la investigación de la señalización de DnaJB3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dnajb3 críticos para la función de DnaJB3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dnajb3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DnaJB3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DnaJB3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dnajb3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DnaJB3 (m) y el plásmido HDR DnaJB3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dnajb3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dnajb3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.