DNAH17 Double Nickaseプラスミド (h): sc-409722-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DNAH17 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DNAH17ダブルニカースプラスミド（h）およびDNAH17ダブルニカースプラスミド（h2）は、DNAH17を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DNAH17 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-409722-NIC | 20 µg | $410.00 |
DNAH17は、繊毛および鞭毛の構造と運動性に寄与する、微小管依存性モーターATPアーゼであるダイニン軸糸重鎖17（dynein axonemal heavy chain 17）をコードします。軸糸ダイニン装置の一部として、DNAH17はATP駆動性の微小管二重tubuleの滑り運動を支え、これが繊毛の拍動パターン形成や精子鞭毛の推進力の基盤となります。本タンパク質は、軸糸の組み立てや繊毛輸送など、運動とシグナル伝達を協調させる過程を含む、細胞骨格の組織化および運動性関連経路で機能します。DNAH17を含む軸糸ダイニンの遺伝学的な攪乱は、精子無力症（asthenozoospermia）などの男性不妊の表現型や、運動性繊毛機能に影響する、より広範な繊毛病（ciliopathy）関連の異常と関連づけられています。
DNAH17 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DNAH17 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DNAH17内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DNAH17の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DNAH17が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。