DNA pol θ Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429582-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DNA pol θO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DNA pol θ (m) e o Plasmídeo Double Nickase DNA pol θ (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Polq. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DNA pol θ Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-429582-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Polq em camundongos codifica a DNA polimerase teta (POLθ), uma polimerase da família A propensa a erros, com atividade intrínseca semelhante à de helicase, que dá suporte à via alternativa de junção de extremidades durante o reparo de quebras de dupla fita no DNA. A POLθ é um efetor central da junção de extremidades mediada por micro-homologia (MMEJ), influenciando a estabilidade do genoma, a tolerância ao estresse replicativo e a resolução de forquilhas de replicação paradas ou colapsadas. Sua atividade interage funcionalmente com a recombinação homóloga e com a junção de extremidades não homólogas clássica, moldando os desfechos mutacionais do reparo de danos ao DNA. O reparo dependente de POLθ, quando desregulado, tem sido associado a fenótipos de instabilidade genômica aumentada, frequentemente estudados em biologia do câncer e em sistemas modelo com defeitos de reparo do DNA.
DNA pol θ O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Polq em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Polq. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Polq. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Polq interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.