DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418231

Übersicht

POLE2 kodiert die DNA-Polymerase-ε-Untereinheit B, eine akzessorische Komponente des Pol-ε-Holoenzyms, die während der S-Phase eine hochfidele DNA-Synthese unterstützt und zur Replikation des Leitstrangs beiträgt. Durch die Kopplung an das Replisom hilft POLE2, die prozessive DNA-Elongation, die Stabilität der Replikationsgabel und die Toleranz gegenüber DNA-Schäden zu koordinieren, und verknüpft so die DNA-Replikation mit Checkpoint-Signalgebung und Signalwegen der Genom-Erhaltung. Eine veränderte Pol-ε-Funktion und Replikationsstress sind mit einer erhöhten Mutationslast und chromosomaler Instabilität assoziiert, wodurch POLE2 ein nützliches Ziel zur Untersuchung von Mechanismen ist, die die Genomintegrität in proliferierenden menschlichen Zellen prägen.

Das DNA pol ε B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLE2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLE2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLE2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DNA pol ε B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLE2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DNA pol ε B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLE2-Exone abzielen, die für die DNA pol ε B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLE2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DNA pol ε B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DNA pol ε B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLE2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DNA pol ε B HDR-Plasmid (h) und DNA pol ε B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLE2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLE2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.