Dmp1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402941

概要

ヒトDMTF1は、Myb様転写因子であるDmp1をコードしており、ARF–MDM2–p53軸を調節し、さらにRB/E2F依存的なG1/S期の転写プログラム制御と交差することで、細胞周期進行を制御する。Dmp1は、増殖およびチェックポイント応答を担う遺伝子のプロモーター配列に結合し、その結果、細胞老化、ストレスシグナル伝達、ならびにがん遺伝子誘導性の増殖制御に影響を与える。DMTF1の活性やコピー数の変化は、増殖制御の破綻や腫瘍抑制ネットワークの不均衡と関連付けられており、がんに関連する状況下での細胞運命決定における転写制御を研究する上で有用なノードとなる。

Dmp1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDMTF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DMTF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DMTF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dmp1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dmp1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DMTF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dmp1の機能に不可欠なDMTF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DMTF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dmp1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDmp1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DMTF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dmp1 HDRプラスミド（h）および Dmp1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDMTF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDMTF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。