DIC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417651

Descripción general

SLC25A10 codifica el transportador mitocondrial de dicarboxilatos (DIC), un transportador de la membrana interna que intercambia malato y succinato por fosfato inorgánico, conectando el flujo de metabolitos mitocondriales con las demandas biosintéticas y redox del citosol. Al regular la disponibilidad de dicarboxilatos, el DIC influye en la anaplerosis, en el equilibrio de precursores gluconeogénicos y lipogénicos, y en la coordinación del ciclo del TCA con la fosforilación oxidativa. La alteración de la actividad de SLC25A10 se ha asociado con la reprogramación metabólica y con respuestas al estrés mitocondrial, lo que lo hace relevante para estudiar vías que acoplan el uso de nutrientes a la función mitocondrial. Como miembro de la familia de transportadores mitocondriales, el DIC también ofrece una herramienta para investigar cómo las limitaciones del transporte condicionan el manejo de ROS y el metabolismo proliferativo en modelos celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DIC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DIC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A10 para la investigación de la señalización de DIC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A10 críticos para la función de DIC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DIC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DIC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DIC (h) y el plásmido HDR DIC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.