DHRS3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411259

Descripción general

DHRS3 (deshidrogenasa/reductasa 3) codifica una deshidrogenasa/reductasa de cadena corta dependiente de NADPH que cataliza la reducción del retinaldehído a retinol, contribuyendo a regular la homeostasis intracelular de retinoides. Al limitar la disponibilidad de retinal para su oxidación a ácido retinoico, DHRS3 modula programas de señalización del ácido retinoico que influyen en la diferenciación, el desarrollo embrionario, la biología epitelial y la adaptación metabólica. La expresión de DHRS3 responde a los retinoides y se integra con procesos de almacenamiento de retinol y relacionados con el estrés oxidativo mediante el control del flujo de aldehídos reactivos. La desregulación del metabolismo de retinoides y la alteración de la actividad de DHRS3 se han asociado con anomalías del desarrollo y con cambios en estados de diferenciación vinculados al cáncer, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por retinoides.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DHRS3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DHRS3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DHRS3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DHRS3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DHRS3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DHRS3 para la investigación de la señalización de DHRS3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DHRS3 críticos para la función de DHRS3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DHRS3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DHRS3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DHRS3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DHRS3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DHRS3 (h) y el plásmido HDR DHRS3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DHRS3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DHRS3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.