DGAT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401735-ACT

A diacilglicerol O-aciltransferase 1 (DGAT1) é uma enzima localizada no retículo endoplasmático que catalisa a etapa terminal da síntese de triacilgliceróis ao acilar o diacilglicerol com acil-CoA de ácidos graxos. Por meio dessa reação determinante na produção de lipídios neutros, a DGAT1 coordena a biogênese de gotículas lipídicas, o tamponamento de ácidos graxos e o armazenamento de energia celular, interagindo com o metabolismo de glicerolipídios e com programas de adaptação ao estresse do RE. A atividade da DGAT1 influencia a montagem de lipoproteínas e a absorção intestinal de lipídios, vinculando sua regulação ao manejo lipídico sistêmico. Alterações na expressão ou na função da DGAT1 têm sido associadas à desregulação metabólica e a fenótipos de estresse celular induzidos por lipídios relevantes para modelos de pesquisa sobre obesidade, resistência à insulina e esteatose hepática.

DGAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DGAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DGAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DGAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DGAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DGAT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DGAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DGAT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DGAT1 em células tumorais com expressão de DGAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.