dendrin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404856-ACT

ヒトDDNは、シナプス後肥厚（postsynaptic density）に関連するタンパク質で、ニューロンに豊富に存在するデンドリン（dendrin）をコードしており、シナプスのシグナル伝達複合体の編成に関与すると考えられています。デンドリンは活動依存的な樹状突起スパインのリモデリングに関与し、シナプス可塑性を形作る細胞骨格の制御やタンパク質間相互作用とも関連しています。中枢神経系（CNS）以外では、デンドリンは糸球体ポドサイトで研究されており、スリット膜関連コンパートメントに局在し、細胞構造やストレス応答に影響する経路との関連が示されています。デンドリンの発現量や局在の異常は、神経精神疾患様の表現型や腎障害に関連する過程の文脈で検討されており、シナプスおよび濾過バリアの完全性を支える機構を解明するための研究標的としての有用性が支持されています。

dendrin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

dendrin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性dendrinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるdendrin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるdendrin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。