Deltex-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420429

Übersicht

Dtx1 codiert für Deltex-1, eine E3-Ubiquitin-Ligase, die als kontextabhängiger Modulator der Notch-Signalübertragung wirkt, indem sie rezeptornahe Signalkomplexe sowie den Umsatz von Komponenten des Signalwegs beeinflusst. Über ubiquitinabhängige Regulation kann Deltex-1 transkriptionelle Outputs formen, die in Mausmodellen Zellschicksalsentscheidungen, Differenzierungsprogramme und die Homöostase von Immunzellen beeinflussen. Die Aktivität von Dtx1 wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Proteostase und Signaltransduktion steuern, einschließlich eines Cross-Talks mit NF-κB-assoziierten Entzündungsprogrammen in bestimmten zellulären Kontexten. Eine fehlregulierte Notch-/Ubiquitin-Signalgebung unter Beteiligung von Deltex-1 wurde im Zusammenhang mit Immundysfunktionen und onkogenen Prozessen untersucht, wodurch Dtx1 einen nützlichen Knotenpunkt für die mechanistische Analyse signalwegabhängiger Phänotypen darstellt.

Das Deltex-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dtx1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dtx1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dtx1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Deltex-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dtx1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Deltex-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dtx1-Exone abzielen, die für die Deltex-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dtx1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Deltex-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Deltex-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dtx1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Deltex-1 HDR-Plasmid (m) und Deltex-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dtx1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dtx1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.