DDX23 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407132

Übersicht

DDX23 kodiert eine DEAD-Box-RNA-Helikase, die als zentraler Bestandteil des U5-snRNP innerhalb des Spleißosoms fungiert, wo sie beim Umbau von RNA-Protein-Komplexen hilft und so das Spleißen von prä-mRNA unterstützt. Durch die Regulation der Erkennung von Spleißstellen und der Dynamik des Spleißosoms beeinflusst DDX23 die Transkriptreifung, das Isoformengleichgewicht und nachgeschaltete Genexpressionsprogramme, die mit Zellzyklusprogression und Stressantworten verknüpft sind. Störungen von spleißosomassoziierten Helikasen können Muster des alternativen Spleißens und die Genauigkeit der RNA-Prozessierung verschieben – Prozesse, die häufig mit onkogener transkriptioneller Umprogrammierung und genomischer Instabilität in Verbindung gebracht werden. Daher wird DDX23 häufig im Kontext des RNA-Metabolismus, der Proteostase und von Signalwegen untersucht, die das Spleißen mit der DNA-Schadenssignalgebung koppeln.

Das DDX23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DDX23-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DDX23-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DDX23 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDX23-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DDX23-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDX23-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DDX23-Exone abzielen, die für die DDX23-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DDX23-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DDX23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DDX23 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DDX23-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDX23 HDR-Plasmid (h) und DDX23 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DDX23-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DDX23-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.