DDX21 Double Nickase Plasmid (h): sc-405770-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DDX21 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DDX21 Double-Nickase-Plasmid (h) und DDX21 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DDX21 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDX21: sc-376953
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDX21 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405770-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDX21 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405770-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDX21 kodiert eine nukleoläre DEAD-Box-RNA-Helikase, die die rRNA-Transkription und -Prozessierung, die Ribosomenbiogenese sowie die höhergeordnete Organisation des Nukleolus koordiniert. Durch ATP-abhängiges Remodeling von RNA-Protein-Komplexen trägt DDX21 zur RNA-Polymerase-I-vermittelten rDNA-Transkription, zur Reifung der Prä-rRNA und zur Kopplung der Ribosomenproduktion an zelluläre Wachstumsprogramme bei. DDX21 wurde außerdem mit der Regulation der mRNA-Translation und der angeborenen Immun-Signalübertragung in Verbindung gebracht, unter anderem über Interaktionen mit RNA-Spezies und Ribonukleoprotein-Komplexen. Eine Fehlregulation nukleolärer Funktionen und der mit DDX21 verknüpften Ribosomenbiogenese-Pathways ist mit proliferativen Stressantworten und veränderten Genexpressionsprogrammen assoziiert, wie sie in verschiedenen Krankheitskontexten beobachtet werden.
DDX21 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DDX21-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DDX21 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DDX21-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DDX21-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.