Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDT (h): sc-418461

Présentation

Le DDT (D-dopachrome tautomérase), également connu sous le nom de MIF-2, est une enzyme de type cytokine qui participe à la signalisation immunitaire et aux réponses au stress cellulaire, en agissant de concert avec l’axe MIF. Il contribue à la régulation de la production de médiateurs inflammatoires, au recrutement des leucocytes et à des signaux pro-survie via des voies qui recoupent les réseaux MAPK/ERK et NF-κB, selon le contexte cellulaire et les récepteurs impliqués. L’expression de DDT a été associée à la modulation de l’immunité innée et adaptative, avec une pertinence rapportée dans l’inflammation associée aux tumeurs, des phénotypes auto-immuns et des dérégulations métaboliques. En tant que facteur soluble doté d’une activité enzymatique, DDT constitue un nœud accessible pour analyser la manière dont la signalisation des cytokines s’intègre aux programmes redox, de prolifération et de migration dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DDT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DDT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DDT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DDT pour l'étude de la signalisation de DDT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DDT essentiels à la fonction de DDT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DDT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DDT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DDT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDT plasmide HDR (h) et le DDT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DDT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DDT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.