DDI1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-428086

Übersicht

Maus-DDI1 (DNA damage-inducible 1 homolog) kodiert ein konserviertes Protein, das über seine Ubiquitin-ähnliche und Ubiquitin-assoziierte Domäne sowie eine retroviralen Proteasen ähnliche Region mit der ubiquitinabhängigen Proteostase in Verbindung gebracht wird. DDI1 wurde mit der Regulation des Proteinumsatzes, der Anpassung an Stress und der Wechselwirkung mit DNA-Schadensantworten verknüpft, was zu einer Rolle bei der Aufrechterhaltung der Proteinkontrolle und der zellulären Homöostase passt. Störungen DDI1-assoziierter Signalwege können die Anreicherung ubiquitinierter Proteine und die Ausgabe von Stress-Signalen beeinflussen, die für Modelle der Neurodegeneration, der Krebsbiologie und von Entzündungsreaktionen relevant sind. In Mausmodellen stellt DDI1 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie ubiquitinvermittelte Signalwege mit Genomstabilität und proteotoxischem Stress zusammenhängen.

Das DDI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ddi1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ddi1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ddi1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDI1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ddi1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDI1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ddi1-Exone abzielen, die für die DDI1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ddi1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DDI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DDI1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ddi1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDI1 HDR-Plasmid (m) und DDI1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ddi1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ddi1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.