Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405179-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dcun1D1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Dcun1D1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DCUN1D1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dcun1D1: sc-81835
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405179-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405179-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCUN1D1 kodiert Dcun1D1, einen Hilfsfaktor für Cullin-RING‑E3‑Ubiquitin-Ligasen, der die Neddylierung von Cullin-Proteinen fördert und dadurch die ubiquitinabhängige Proteostase verstärkt. Über die Regulation der Cullin-Aktivierung beeinflusst Dcun1D1 den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und den signalabhängigen Abbau zentraler regulatorischer Proteine. Eine veränderte Expression oder Amplifikation von DCUN1D1 wurde mit fehlregulierten Wachstumsprogrammen in Verbindung gebracht und in mehreren Tumorkontexten beschrieben, was seine Eignung als molekularer Knotenpunkt für die Untersuchung onkogener ubiquitinähnlicher Modifikationswege unterstreicht. Die Forschung zu DCUN1D1 hilft zu klären, wie die NEDD8-Konjugation mit der Ubiquitinierung zusammenwirkt, um Proteinstabilität und zelluläre Fitness unter Stress zu steuern.
Dcun1D1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DCUN1D1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DCUN1D1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DCUN1D1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DCUN1D1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.