DC-STAMP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402527-ACT

DCSTAMP codifica a DC-STAMP, uma proteína transmembranar multipasso essencial para eventos de fusão célula–célula que geram osteoclastos multinucleados e células gigantes de corpo estranho a partir de precursores monócitos/macrófagos. A DC-STAMP integra sinais da osteoclastogênese induzida por RANKL e da sinalização inflamatória para coordenar a diferenciação e a fusão, influenciando a reabsorção óssea e a remodelação do microambiente imune. A atividade desregulada de DC-STAMP está associada a alterações na função dos osteoclastos e tem sido estudada em contextos de perda óssea inflamatória, inflamação autoimune e osteoclastogênese associada a tumores. Como regulador da fusão e maturação na linhagem mieloide, a DC-STAMP é uma ferramenta útil para dissecar mecanismos de polarização de macrófagos, multinucleação e vias relevantes para a osteoimunologia.

DC-STAMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCSTAMP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DC-STAMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCSTAMP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCSTAMP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DC-STAMP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCSTAMP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DC-STAMP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DC-STAMP em células tumorais com expressão de DCSTAMP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.