Plasmide CRISPR/Cas9 KO DBT (h): sc-410755

Présentation

La dihydrolipoamide transacylase des acides aminés à chaîne ramifiée E2 (DBT) est le composant central E2 du complexe mitochondrial de la déshydrogénase des α‑cétoacides à chaîne ramifiée (BCKDH), catalysant des étapes de transfert d’acyle essentielles au catabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée. DBT soutient le flux de carbone mitochondrial et l’équilibre rédox en permettant l’oxydation efficace des cétoacides dérivés de la leucine, de l’isoleucine et de la valine, reliant l’utilisation des acides aminés à la production d’énergie. Son activité est coordonnée avec la phosphorylation régulatrice du BCKDH et influence les réponses au stress métabolique, la fonction mitochondriale et les voies de détection des nutriments. Une perturbation ou une régulation altérée de DBT et des composants associés du BCKDH est liée à des erreurs innées du métabolisme affectant l’homéostasie des acides aminés à chaîne ramifiée et est fréquemment étudiée dans le contexte du remaniement métabolique et de la dysfonction mitochondriale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DBT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DBT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DBT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DBT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DBT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DBT pour l'étude de la signalisation de DBT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DBT essentiels à la fonction de DBT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DBT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DBT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DBT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DBT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DBT plasmide HDR (h) et le DBT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DBT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DBT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.