Plasmide CRISPR/Cas9 KO DACH1 (h): sc-404712

Présentation

DACH1 (dachshund family transcription factor 1) est un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, impliqué dans les décisions de destinée cellulaire et les programmes de différenciation tissulaire, avec des rôles importants dans la signalisation du développement. Dans les cellules humaines, DACH1 module des réseaux transcriptionnels liés au contrôle de la prolifération, au maintien de la lignée épithéliale et à la migration cellulaire, notamment via des interactions avec la signalisation des récepteurs hormonaux et d’autres circuits de facteurs de transcription. Une expression ou une activité régulatrice altérée de DACH1 a été associée à des modifications de phénotypes suppresseurs de tumeurs, affectant des processus tels que la progression du cycle cellulaire, l’invasion et l’expression de gènes liés aux métastases. Sa fonction dépendante du contexte fait de DACH1 un nœud utile pour étudier l’équilibre entre répression et activation transcriptionnelles ainsi que le remodelage des voies de signalisation dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DACH1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DACH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DACH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DACH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DACH1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DACH1 pour l'étude de la signalisation de DACH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DACH1 essentiels à la fonction de DACH1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DACH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DACH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DACH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DACH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DACH1 plasmide HDR (h) et le DACH1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DACH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DACH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.