DACH1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404712-ACT

DACH1 (Dachshund family transcription factor 1) codifica un regolatore nucleare legante il DNA che modula i programmi di patterning dello sviluppo e le decisioni sul destino cellulare coordinando reti trascrizionali. Nelle cellule umane, DACH1 influenza proliferazione, differenziamento e stato epitelio–mesenchimale attraverso interazioni con la segnalazione dei recettori ormonali e con complessi regolatori associati alla cromatina, incidendo su vie che governano la progressione del ciclo cellulare e l’impegno di linea. Un’espressione o un’attività deregolata di DACH1 è stata collegata ad alterazioni dell’omeostasi tissutale e a fenotipi associati ai tumori in molteplici contesti oncologici, dove può influenzare invasività, controllo della crescita e programmi trascrizionali. In quanto nodo di via che integra la trascrizione dello sviluppo con la segnalazione oncogenica, DACH1 è spesso oggetto di studio nelle ricerche sulla regolazione trascrizionale, la plasticità cellulare e la rimodulazione dipendente dal contesto delle reti geniche.

DACH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DACH1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DACH1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DACH1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DACH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DACH1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DACH1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DACH1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DACH1 nelle cellule tumorali con espressione di DACH1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.