DABP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405222

Descripción general

El DBP humano codifica la proteína de unión a la vitamina D (DABP, también conocida como componente específico de grupo), una glucoproteína plasmática muy abundante que transporta metabolitos de la vitamina D y contribuye a la regulación de su biodisponibilidad. Más allá de su función de transporte, la DABP participa en la depuración de actina durante el daño tisular e interactúa con procesos de la inmunidad innata mediante actividades relacionadas con la activación de macrófagos. La variación en DBP se ha investigado en contextos de alteraciones de la homeostasis de la vitamina D y fenotipos inflamatorios, lo que respalda su uso en estudios de la comunicación entre los sistemas endocrino e inmunitario. Por tanto, la expresión de DBP y la unión de ligandos mediada por DABP son relevantes para las vías que gobiernan el metabolismo de la vitamina D, las respuestas de barrera y al daño tisular, y la señalización inflamatoria sistémica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DABP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DBP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DBP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DBP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DABP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DBP para la investigación de la señalización de DABP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DBP críticos para la función de DABP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DBP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DABP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DABP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DBP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DABP (h) y el plásmido HDR DABP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DBP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DBP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.