Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 6A: sc-401650-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 6A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 6A Double Nickase (h) et le plasmide Cytokeratin 6A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT6A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 6A | sc-401650-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cytokeratin 6A | sc-401650-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT6A code la cytokératine 6A, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme des hétérodimères avec des kératines de type I afin de constituer le cytosquelette de kératine dans les épithéliums stratifiés. La cytokératine 6A contribue à la résistance mécanique, régule la migration des kératinocytes et le remodelage associé aux plaies, et interagit avec l’adhérence desmosomale ainsi qu’avec des voies de signalisation du cytosquelette qui coordonnent les réponses au stress. Son expression est induite lors de l’hyperprolifération et de la réparation tissulaire, reliant KRT6A aux programmes de différenciation épithéliale et au maintien de la barrière. Une dérégulation de KRT6A a été associée à des troubles de la kératinisation et à des pathologies épithéliales, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de l’épiderme, de l’organisation du cytosquelette et des réseaux transcriptionnels induits par le stress.
Cytokeratin 6A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT6A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT6A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT6A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT6A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.