Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 18: sc-400305-NIC

KRT18 codifica la citoqueratina 18, una proteína de filamento intermedio de tipo I que heteropolimeriza con la queratina 8 para formar la red citoesquelética central de las células epiteliales simples. La citoqueratina 18 contribuye a la estabilidad mecánica celular, al posicionamiento de los orgánulos y a la polaridad epitelial, y se remodela dinámicamente durante la mitosis y las respuestas al estrés mediante una reorganización de los filamentos dependiente de la fosforilación. Participa en cambios del citoesqueleto asociados a la apoptosis, incluida la escisión mediada por caspasas, que puede influir en la integridad y la señalización de las células epiteliales. Las alteraciones en la expresión de KRT18, en la organización de los filamentos o en los patrones de escisión se han asociado con lesión epitelial y con diversos estados patológicos, por lo que es un marcador común y un punto mecanístico clave en estudios de homeostasis epitelial y estrés.

Cytokeratin 18 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT18 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT18. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT18. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT18 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.