cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404958-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cytochrome c1 Double-Nickase-Plasmid (h) und cytochrome c1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cytochrome c1: sc-514435
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404958-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cytochrome c1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404958-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **CYC1** kodiert **Cytochrom c1**, eine essentielle Untereinheit des mitochondrialen **Komplexes III** (Cytochrom-bc1-Komplex), der innerhalb der inneren Mitochondrienmembran Elektronen von **Ubiquinol** auf **Cytochrom c** überträgt. Diese Aktivität unterstützt die oxidative Phosphorylierung, indem sie zur Protonentranslokation beiträgt und damit den elektrochemischen Gradienten mit aufbaut, der für die ATP-Synthese genutzt wird. Störungen von Komplex-III-Komponenten können das mitochondriale Redoxgleichgewicht und die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies verändern und verknüpfen die Biologie von CYC1 mit Signalwegen, die den zellulären Energiestoffwechsel und Stressantworten steuern. Eine dysregulierte mitochondriale Atmung und eine beeinträchtigte Integrität der Elektronentransportkette werden häufig im Zusammenhang mit metabolischer Umprogrammierung und mitochondriale Dysfunktion bei Neurodegeneration untersucht.
cytochrome c1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.