cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426027

概要

マウスCyc1は、ミトコンドリア複合体III（ユビキノール‐シトクロムc還元酵素）の必須サブユニットであるシトクロムc1をコードしており、ミトコンドリア内膜上でユビキノールからシトクロムcへの電子移動を仲介します。Qサイクルにおける役割を通じて、シトクロムc1はATP合成を駆動するプロトン駆動力の生成に寄与し、細胞の酸化還元恒常性の維持も支えます。複合体III構成要素の機能が損なわれると、酸化的リン酸化が障害され、活性酸素種（ROS）が増加し、アポトーシスシグナルや、マイトファジーなどのミトコンドリア品質管理経路に二次的な影響を引き起こし得ます。そのためCyc1は、ミトコンドリア機能障害や代謝ストレスのモデル、ならびに神経筋疾患や神経変性疾患の機序と交差する研究において広く解析されています。

cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCyc1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cyc1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cyc1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cytochrome c1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cytochrome c1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cyc1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cytochrome c1の機能に不可欠なCyc1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cyc1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cytochrome c1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびcytochrome c1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cyc1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cytochrome c1 HDRプラスミド（m）および cytochrome c1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCyc1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCyc1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。