cytochrome c CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417607

Übersicht

CYCS kodiert das humane Cytochrom c, einen hämhaltigen Elektronenträger im Intermembranraum der Mitochondrien, der Elektronen zwischen Komplex III (Cytochrom-bc1) und Komplex IV (Cytochrom-c-Oxidase) überträgt und so die oxidative Phosphorylierung und die zelluläre ATP-Produktion unterstützt. Über die Bioenergetik hinaus ist Cytochrom c ein zentraler Vermittler der intrinsischen Apoptose: Durch die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran kann es ins Zytosol freigesetzt werden, wo es anschließend mit APAF1 und Caspase-9 das Apoptosom bildet. Die Funktion von CYCS überschneidet sich mit der Redox-Homöostase, der mitochondrialen Dynamik und der Stressantwort-Signalgebung und ist daher für Untersuchungen mitochondrialer Dysfunktion breit relevant. Veränderungen der cytochrom-c-abhängigen Atmung und der apoptotischen Kompetenz werden häufig in Kontexten wie Neurodegeneration, kardiometabolischer Schädigung und krebsassoziierten Überlebensphänotypen untersucht.

Das cytochrome c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYCS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYCS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYCS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cytochrome c-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYCS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cytochrome c-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYCS-Exone abzielen, die für die cytochrome c-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYCS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cytochrome c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom cytochrome c CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYCS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cytochrome c HDR-Plasmid (h) und cytochrome c HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYCS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYCS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.