Plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c (h): sc-417607

Présentation

CYCS code le cytochrome c humain, un transporteur d’électrons contenant un hème situé dans l’espace intermembranaire mitochondrial, qui transfère des électrons entre le complexe III (cytochrome bc1) et le complexe IV (cytochrome c oxydase) afin de soutenir la phosphorylation oxydative et la production d’ATP cellulaire. Au-delà de la bioénergétique, le cytochrome c est un médiateur central de l’apoptose intrinsèque : la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale permet sa libération dans le cytosol et l’assemblage ultérieur de l’apoptosome avec APAF1 et la caspase-9. La fonction de CYCS recoupe l’homéostasie redox, la dynamique mitochondriale et la signalisation des réponses au stress, ce qui en fait une cible largement pertinente pour l’étude des dysfonctions mitochondriales. Des altérations de la respiration dépendante du cytochrome c et de la compétence apoptotique sont fréquemment examinées dans des contextes tels que la neurodégénérescence, les atteintes cardiométaboliques et les phénotypes de survie des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYCS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYCS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYCS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cytochrome c.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYCS pour l'étude de la signalisation de cytochrome c, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYCS essentiels à la fonction de cytochrome c
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYCS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cytochrome c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le cytochrome c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYCS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cytochrome c plasmide HDR (h) et le cytochrome c (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYCS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYCS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.