cytochrome b5 Double Nickase Plasmid (h): sc-405811-NIC

Das humane Gen **CYB5A** kodiert für **Cytochrom b5**, ein membranverankertes Hämoprotein, das Elektronen von der **NADH–Cytochrom-b5-Reduktase** auf mehrere oxidative Enzyme im **endoplasmatischen Retikulum** und in der **äußeren Mitochondrienmembran** überträgt. Es unterstützt zentrale Stoffwechselwege des Lipidmetabolismus, darunter **Fettsäure-Desaturierung und -Elongation**, **Cholesterin- und Steroidbiosynthese** sowie die **Xenobiotika-Oxidation** durch Modulation der katalytischen Zyklen von **Cytochrom P450**. Durch seinen Einfluss auf das Redoxgleichgewicht und den metabolischen Fluss trägt CYB5A zur zellulären Homöostase in **Hepatozyten** und **steroidogenen Geweben** bei, in denen der oxidative Stoffwechsel hoch ist. Störungen des CYB5A-abhängigen Elektronentransfers wurden mit verändertem Arzneistoffmetabolismus und Defekten der Steroidogenese in Verbindung gebracht, was CYB5A zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung metabolischer Dysregulation und redoxsensitiver Signalwege macht.

cytochrome b5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYB5A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYB5A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYB5A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYB5A-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.