Plásmido Doble Nickase (h) Cyr61/CCN1: sc-400366-NIC

CYR61 (Cyr61/CCN1) codifica una proteína matricelular secretada de la familia CCN que integra señales de la matriz extracelular con receptores de la superficie celular para regular la adhesión, la migración, la proliferación y la supervivencia. Cyr61/CCN1 activa señalización dependiente de integrinas y de heparán sulfato y modula vías posteriores, incluidas la adhesión focal/FAK, MAPK/ERK y PI3K/AKT, conectando las entradas mecánicas e inflamatorias del microambiente con programas de expresión génica. En tejidos humanos, la expresión alterada de CYR61 se asocia con angiogénesis, reparación de heridas, fibrosis e interacciones tumor–estroma, por lo que es relevante para estudiar la remodelación de la matriz extracelular y la señalización dependiente del contexto. Estas características respaldan su uso como un nodo para investigar la comunicación célula–matriz, las respuestas endoteliales y redes transcripcionales inducidas por estrés.

Cyr61/CCN1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYR61 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYR61. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYR61. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYR61 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.